کیت استخراج DNA چیست؟

بهتر است قبل از توضیح درباره‌ی کیت استخراج DNA  کمی درمورد استخراج DNA صحبت کنیم تا با این فرایند بسیار مهم و کاربردی آشنا شویم. استخراج DNA به فرایندی گفته می‌شود که در طی آن مولکول DNA با استفاده از روش های فیزیکی و شیمیایی

از نمونه ی مورد نظر ( ویروس ، باکتری ، سرم ، خون ، نمونه های گیاهی و.... )  جدا می‌شود. استخراج DNA برای انواع کاربرد های زیست شناسی مولکولی به‌کار می‌رود و امروزه با توجه به پیشرفت گسترده‌ی علوم می‌توان برای شناخت بسیاری از پدیده ها‌‌ی زیستی  از آن کمک گرفت. استخراج DNA از زمانی که در سال 1869 برای اولین بار انجام شد تا به امروز پیشرفت های چشمگیری کرده است.

به طور کلی استخراج DNA اساسا از چهار مرحله تشکیل شده است که شامل مراحل زیر است :

1. تهیه عصاره سلولی

برای تهیه ی عصاره سلولی از بافت یا سلول های مورد نظر ، ابتدا غشاهای سلولی را با استفاده از بافر از بین می‌بریم. سپس از EDTA برای از بین بردن یون های Mg⁺²  که برای حفظ ساختار کلی غشای سلول ضروری است، استفاده می کنیم. در نهایت با استفاده از SDS چربی های غشای سلول را از بین می بریم که این کار نیز به حفظ ساختار سلول کمک می کند. بقایای سلولی و دیگر اجزای هضم شده را با سانتریفیوژ ته نشین می کنیم تا عصاره سلولی دیده شود.

لازم به یادآوری است که DNA را می توانیم از هر نمونه ای استخراج کنیم ولی عموما  نمونه‌ی خون محیطی بهترین نوع نمونه برای ما است.

2. خالص سازی DNA از عصاره سلولی

روش متداول برای خالص سازی DNA اضافه کردن محلول آلی فنول_کلروفرم است. این حلال های آلی باعث رسوب پروتئین می شوند و اسید های نوکلئیک را در محلول های آبی رها می‌کنند.

فنول ماده ای با خاصیت اسیدی بالایی است که می تواند مولکول های زیستی مانند پروتئین ها را از بین ببرد. با توجه به پایین بودن حلالیت فنول ، پس از مخلوط شدن با نمونه های آبی حاوی DNA و پروتئین دو فاز جدا از هم تشکیل می‌دهد.

3. تغلیظ نمونه های DNA

برای تغلیظ کردن نمونه از اتانول استفاده می کنیم که در حضور نمک و در دمای 20- درجه سانتی گراد و یا کمتر می تواند باعث رسوب DNA شود.

4. اندازه گیری خلوص و غلظت DNA

برای اندازه‌گیری غلظت DNA از طیف سنجی استفاده می‌کنیم که می‌توان جذب UV را با دقت اندازه‌گیری کرد. میزان تابش اشعه  ماورای بنفش جذب شده ، توسط محلول های DNA مستقیما با مقدار نمونه متناسب است. بهتر است بدانیم عصاره ی سلولی حاوی مقادیری RNA می باشد که برای حذف آن از آنزیم ریبونوکلئاز استفاده می‌کنیم.

روش هایی که برای استخراج DNA به کار می‌رود متفاوت بوده که بسته به نوع نمونه ، اندازه و زمان نمونه گیری متفاوت هستند اما با این حال به وجود اشتراکاتی بین این روش ها دیده می‌شود. بهترین روش ها برای استخراجDNA  استفاده از کیت های تحقیقاتی و روش نمک زدن است که استفاده از کیت ها نسبت به تمامی روش ها ارجحیت دارد.

کیت ها به دو دسته ی تحقیقاتی ( الایزا، PCR ، استخراج و آمینو اسید )  و آزمایشگاهی ( اعتیاد ، بارداری ، بیماریهای قلبی ، بیماری های عفونی و کرونا )  تقسیم می‌شوند که هر کدام کاربرد های مخصوص به خود را دارد.

امروزه با توجه به پیشرفت دانش زیست شناسی ، استفاده از کیت های تحقیقاتی نسبت به قبل افرایش یافته و همین امر موجب افزایش تقاضا برای کیت های تحقیقاتی شده است.

استخراج DNA با روش نمک زدن ( Salting out ) :

به طور کلی این روش شامل لیز کردن سلول با یک دترجنت یا شوینده ، حذف پروتئین ها با نمک و پروتئیناز K و سرانجام رسوب با اتانول می باشد.

مراحل به شرح زیر است :

1. اضافه کردن آب مقطر به عنوان بافر لیز کننده
2. اضافه کردن بافر لیز کننده که از این بافر جهت لیز کردن و یا از بین بردن دیواره‌ی هسته استفاده می شود
3. که از ترکیب 3 ماده NACL ،EDTA و Tris با غلظت های خاص آماده می شود.
4. اضافه کردن SDS %10  جهت دناتوره کردن پروتئین
5. اضافه کردن پروتئیناز K
6. اضافه کردن NACL اشباع که ضمن حذف پروتئین ها با اتصال به DNA  ، آن را از سایر قسمت ها جدا می‌کنیم.
7. اضافه کردن اتانول مطلق ، برای کریستاله کردن DNA و ظاهر شدن رشته های DNA
8. ظاهر کردن بافر TE جهت حل شدن رسوب DNA

کیت های استخراج DNA  با استفاده از پروتکل های بهینه شده ، قادر به جداسازی DNA ژنومی از طیف وسیعی از انواع نمونه است. اساس کار کیت های استخراج که برای جداسازیDNA ، RNA  و پروتئین به کار می روند به گونه ای است که خون ، بافت تازه و یا فریز شده ، سرم ، گیاه و .....از ماده‌ی مورد نظر استخراج شده و مورد آزمایش قرار می گیرد. کیت های استخراج DNA در دو قالب مهره ای و ستونی وجود دارد که قالب ستونی آن کاربرد بیشتری دارد.

کیت های استخراج DNA شامل :

پروتئیناز K

بافر تخریب کننده

بافر حلال

پروتئاز

محلول لیزین

ایزوپروپانول

بافر شستشو1 ( بهتر است قبل از استفاده برای اولین بار ، به بافر 8 میلی لیتر اتانول 96 _ 100 % اضافه کنیم.)

بافر شستشو2 ( قبل از استفاده برای اولین بار ، 40 میلی لیتر اتانول 96_100 % اضافه کنیم. )

شرایط نگهداری :

محتویات کیت بهتر است در دمای 15 الی 25 درجه نگهداری شود.

کمپانی Glenbio یک کمپانی انگلیسی تولید کننده انواع کیت آزمایشگاهی و سایر تجهیزات آزمایشگاهی می باشد که با ورود به وب سایت این کمپانی می توانید اطلاعات بیشتری کسب کنید.

لطفا جهت اخذ مشاوره و استعلام قیمت با کارشناسان شرکت کیمیا طب گستر تماس حاصل بفرمایید.

منبع: هلدینگKTG

مقاله: کیت استخراج DNA چیست؟

پی اچ متر یا pH متر چیست؟

پی اچ  متر یک ابزار علمی و نیز از جمله تجهیزات آزمایشگاهی لازم در انواع آزمایشگاه‌ها به منظور اندازه‌گیری فعالیت‌های هیدروژن-یونی در انواع محلول‌ها است. در حقیقت، بهره‌گیری از این دستگاه روشی جهت تعیین اسیدی یا قلیایی بودن ماده مورد نظر است. وظیفه این دستگاه آزمایشگاهی نمایش کمیت لگاریتمی به کاربر است.

علاوه بر این Ph متر به اندازه‌گیری تفاوت در پتانسیل الکتریکی میان یک ph الکتریکی و الکترود مرجع نیز می‌پردازد. بر همین اساس ph  متر را گاها پتانسیومتریک نیز می‌نامند. تفاوت الکتریکی بودن نیز بستگی به اسیدی یا قلیایی بودن مایعات دارد. به طور معمول ph  متر در آزمایشات آزمایشگاه‌های گوناگون و کنترل کیفی به کار برده می‌شود. در ابتدا که مفهوم پی اچ  متر بیان شد، منظور از ph  بودن، میزان یون H  موجود در آب بود. دلیل نام‌گذاری ph  (اختصار قدرت یون هیدروژن) هم میزان یون H  است.

 پی اچ متر چیست؟

پی اچ متر دستگاهی است که جهت اندازه‌گیری مقدار اسیدی یا قلیایی بودن یک محلول به کار برده می‌شود. این خاصیت اسیدی یا قلیایی بودن را PH  محلول هم می‌گویند. از این رو PH  به واحدی گفته می‌شود که مقدار اسیدی یا قلیایی بودن یک محلول را به کمک آن مشخص می‌کنند. مقدار ph در یک دوره 0 تا 14 نشان داده می‌شود.

اطلاعات عددی که از طریق  دستگاه پی اچ متر نشان داده می‌شود، بیان کننده مقدار فعالیت اسید یا باز بر اساس مقدار فعالیت یون هیدروژن است. مقدار پی اچ یک ماده ارتباط مستقیمی با نسبت یون هیدروژن و یون هیدروکسیل آن ماده دارد. در صورتی که مقدار یون هیدروژن بیشتر از یون هیدروکسیل باشد، ماده اسیدی است و مقدار پی اچ هم از عدد ۷ کمتر خواهد بود. در صورتی که مقدار یون هیدروکسیل بیشتر از یون هیدروژن باشد، ماده باز است و میزان پی اچ  آن بیشتر از عدد 7 خواهد بود.

در صورتی که مقدار یون هیدروژن و یون هیدروکسیل موجود در یک ماده مساوی باشد، ماده خنثی بوده و پی اچ  آن هم عدد 7 خواهد بود. ماده‌های اسیدی از یون‌های هیدروژن آزاد برخوردار بوده و ماده‌های بازی از یون‌های هیدروکسیل آزاد برخوردار هستند. درصد یون‌های آزاد در یک محلول تحت شرایط خاص همواره ثابت است. دستگاه پی اچ متر دستگاهی است که می‌توان از طریق آن خواص اسیدی یا بازی یک ماده را مورد ارزیابی قرار داد.

 کاربرد ph  متر چیست؟

از جمله کاربرد‌های اصلی ph مترها می‌توان در آزمایشگاه‌های صنایع غذایی، دارویی، صنایع کشاورزی و دامپروری، تصفیه خانه‌ها، آزمایشگاه‌های صنعتی و پزشکی و به صورت کلی جهت کلیه آزمایشاتی که مقدار اسیدی بودن در آنها حائز اهمیت است، اشاره داشت. ph  متر مقدار مولکول‌های یونیزه شده به غیر یونیزه شده در محیط‌های آبی را به روش علمی نمایش می‌دهد. از جمله کاربرد‌های ph  متر، تعیین مقدار ph  مایعات بوده که این مسئله به دو شیوه صورت می‌گیرد.

۱. به کارگیری از ph  متر الکتریکی: در پی اچ متر الکتریکی، پتانسیل الکتریکی میان دو الکترود اندازه‌گیری شده و عدد مورد نظر همان مقدار یون هیدروژن در آن است که بایستی به جدول مراجعه نمود و یون هیدروژن را بر اساس آن اندازه‌گیری کرد.

۲. تعیین ph  متر به شیوه رنگ سنجی (کاغذ ph  متر)

نحوه استفاده از محصول

رایج‌ترین شیوه در محاسبه ph  متر، استفاده از شناساگرهای شیمیایی (معرف‌ها) و تجهیزات الکترونی است. شناساگرهای شیمیایی الیاف، کاغذ یا محلول خاصی است که در محیط اسیدی و بازی تغییر رنگ می‌دهند. این دستگاه دارای دو قسمت است.

1. میله کاوشگر 
2. اندازه گیر

ph محلول توسط میله کاوشگر به سیگنال الکترونیکی تبدیل می‌شود و اندازه‌گیر به تحلیل آن می‌پردازد. لازم به ذکر است که ph  متر در هر آزمایشگاهی که با محلول سروکار دارد، به کار برده می‌شود. علاوه بر این در آزمایشگاه‌های تخصصی به منظور اندازه‌گیری ph  فراورده‌های خون مورد استفاده قرار می‌گیرد. به طور تخصصی‌تر، پی اچ متر پلاسما به منظور سنجش وضعیت بالینی بیمار به کار برده می‌شود که به طور معمول بین 7/35 تا 7/45 است.

مقدار عدد اسیدی یا باز بودن مایعات بین صفر تا 14 بوده و عدد 7 که یک میانگین محسوب می‌شود به معنی خنثی است. از عدد صفر تا 7 اسیدی و از عدد 7 تا 14 بازی است. بر همین اساس هر اندازه عدد نزدیک به صفر باشد، میزان اسیدی بودن بالاتر بوده و هر اندازه عدد نزدیک به 14 باشد، مقدار قلیایی بودن بالاتر است. جالب است بدانید که آب خالص هم دارای حالت خنثی است. به طور مثال ph  آب آشامیدنی بایستی تقریبا عدد 7 باشد. پی اچ آب کمتر از عدد 7 منجر به خوردگی فلزات به ویژه آهن می ‌گردد. بر همین اساس غلظت آب را در صنعت بیشتر از عدد 7 تنظیم می‌کنند. بین سرعت خوردگی و افزایش دما رابطه مستقیم وجود دارد. از این رو کنترل دما و پی اچ متر در تمامی صنایع امری کاملا ضروری است.

انواع PH  متر کدامند؟

پی اچ متر قلمی ( تستر): این نوع pH  مترها ارزان، سبک و کوچک بوده، اما از دقت کمتری در مقایسه با pH  مترهای پرتابل برخوردار هستند.

پی اچ متر پرتابل ( PH  متر قابل حمل ):این نوع pH  مترها بزرگ‌تر و گران‌تر بوده و به طور معمول از کارایی بیشتری در مقایسه با نوع اول برخوردار هستند. لازم به ذکر است که به نوع اول هم پرتابل گفته می‌شود، اما پرتابل قلمی.

پی اچ متر رومیزی ( PH   متر آزمایشگاهی ): این نوع pH  متر از دقت بسیار بالاتری برخوردار بوده و یک‌سری از آنها دارای قابلیت ارزیابی پارامترهای مختلفی علاوه بر pH  هم هستند. این نوع بر عکس موارد قبل از قابلیت حمل‌ونقل برخوردار نبوده و بایستی در محل ثابتی قرار بگیرند.

فروش ph متر در هلدینگ KTG

در این مطلب از هلدینگ  ktg به طور کامل در رابطه با پی اچ متر صحبت شد. در صورتی که قصد خرید لوازم آزمایشگاهی به خصوص ph متر را دارید، می‌توانید با ما تماس حاصل نمایید و محصول مورد نظر خود را با بهترین کیفیت و در سریع‌ترین زمان ممکن سفارش دهید. به منظور اطلاع دقیق از قیمت دستگاه ph  متر و دریافت مشاوره خرید همین حالا با کارشناسان هلدینگ  ktg تماس حاصل فرمایید.

منبع: هلدینگKTG

مقالات : pH متر چیست؟